Tin tổng hợp

Phương Pháp Southern Blot – Ứng Dụng Và Nguyên Lý Của Kỹ Thuật Southern Blot – viettingame

Kỹ thuật Southern blot là phương pháp lai giữa DNA của tế bào với mẫu dò DNA. Southern Blot cho phép phân tích DNA của bộ gen, kiểm tra thành quả chuyển gen hoặc kiểm tra sự xuất hiện của một gen nào khác trong bộ gen của tế bào.

Đang xem: Phương pháp southern blot

Series bài viết1. PCR cơ bản2. Realtime PCR3. Multiplex PCR4. Western Blot5. Southern Blot

Nguyên tắc kỹ thuật southern blot

Dựa trên nguyên tắc biến tính và hồi tính của phân tử DNA.Phụ thuộc vào nguyên tắc bổ sung cập nhật giữa những cặp nucleotide: A-T, G-C (những đoạn polynucleotide mạch đơn mang trình tự bổ sung cập nhật).

Màng lai nitrocellulose hay nylon mang kinh nghiệm tiếp nhận DNA.

Nguyên tắc lai southern blot

Phản ứng lai cần nhiệt độ cao hoặc hoá chất gây biến tính DNA ( NaOH, Formandehyt).Yên cầu một quãng DNA (RNA) đã biết trình tự để làm mồi “Probe”. Probe được ghi lại.Những vật liệu, trang thiết bị máy móc đúng mực: màng lai, máy Blotting, buồng lai, máy PCR.

Quy trình

Mức độ 1: Tách chiết và làm biến tính những DNA thành sợi đơn

Tách chiết DNA cần nghiên cứuDNA được cắt bởi những enzyme giới hạn (RE) thành những đoạn kích thước không giống nhau.Thành phầm cắt được điện di trên gel agaroseDNA mạch kép được xử lý với kiềm, biến tính thành DNA mạch đơn ngay trên gel.

Mức độ 2: Chuyển DNA từ gel agarose lên màng lai (nylon hoặc nitrocellulose)

Chuyển DNA vừa biến tính lên màng laiMàng lai sau quy trình trên được xử lý nhiệt hoặc chiếu tia UV để cố định và thắt chặt DNA trên màng.

Xem thêm: ” Break Down Nghĩa Là Gì ? Nghĩa & Cách Sử Dụng Trong Từng Trường Hợp

Mức độ 3: Lai với mẫu dò và kiểm tra bằng kỹ thuật phóng xạ tự ghi.

Lai những DNA cố định và thắt chặt trên màng lai với mẫu dò mang ghi lại phóng xạ, biotin hoặc mẫu dò phát quang sinh học. Quy trình này dựa trên nguyên tắc bổ sung cập nhật của những mẫu dò với DNA cố định và thắt chặt.Sau quy trình lai, màng lai được rửa để loại những mẫu dò ko bắt cặp cặp chuyên biệt với DNA trên màng.

Sau cuối, nhờ kỹ thuật phóng xạ tự ghi (so với đầu dò ghi lại phóng xạ), phương pháp so màu (với đầu dò ghi lại bằng biotin) hay phụ thuộc sự phát quang (với những đầu dò phát quang sinh học) để xác định DNA –probe.

*
*

Kỹ thuật southern blot

Ứng dụng của kỹ thuật southern blot

Southern blot được sử dụng dể Reviews bạn dạng copy của gen trong genome, xác định những intron, exon, những đoạn bị đột biến thêm hoặc mất đoạn…

Lúc sử dụng những DNA marker không giống nhau làm mẫu dò, mà thậm chí phân biệt được những loài, những loài đồng hình.

Xem thêm: game 3d trực tuyến 2016

Southern blot – RFLP: giúp phát hiện sự nhiều chủng loại chiều dài những đoạn cắt bởi RE, qua đó, nhận thấy sự sai biệt di truyền ở vị trí nhận thấy của những RE kéo theo sai biệt trong chiều dài của những đoạn DNA tạo ra từ RE đó. Đồng thời cùng lúc, RFLP còn sử dụng để xác định huyết thống, lập bạn dạng đồ giới hạn gen.

Về Viettingame.com

Viettingame.com - Chuyên trang web tổng hợp những thông tin hữu ích trên internet như thông tin về game, tin tổng hợp
Xem tất cả các bài viết của Viettingame.com →

Trả lời

Email của bạn sẽ không được hiển thị công khai. Các trường bắt buộc được đánh dấu *