Hỏi đáp

Flow Cytometry Là Gì – Kỹ Thuật Đếm Tế Bào Dòng Chảy (Flow Cytometry) – viettingame

    Flow cytometry là kỹ thuật sở hữu kinh nghiệm đo được những đặc tính huỳnh quangquang học của một tế bào đơn hoặc những hạt như vi sinh vật, nhân và nhiễm sắc thể được sẵn sàng trong dung dịch lỏng lúc chúng đi qua một nguồn sáng sủa. Những máy flow cytometry trước hết là một thiết bị đơn thông số kỹ thuật (single-parameter) chỉ được sử dụng để phát hiện kích thước của tế bào. Hiện nay, những thiết bị với độ phức tạp cao sở hữu kinh nghiệm phát hiện đồng thời cùng lúc 14 thông số kỹ thuật đang được phát triển. Nguyên tắc cơ bạn dạng của kỹ thuật này liên quan tới ánh sáng sủa tán xạ và ánh sáng sủa huỳnh quang phát ra, được tạo ra do nguồn sáng sủa thúc đẩy (thông thường là chùm tia laze). Những thông số kỹ thuật thu được mà thậm chí là thông tin giá trị về những khía cạnh hóa sinh, tâm sinh lý và phân tử của hạt. Ánh sáng sủa tán xạ trong kỹ thuật sở hữu liên quan trực tiếp tới những Đặc điểm cấu trúc và hình thái học của tế bào, trong lúc đó, ánh sáng sủa huỳnh quang sở hữu nguồn gốc từ những đầu dò lưu lại huỳnh quang, tỉ lệ thuận với lượng đầu dò huỳnh quang gắn vào tế bào và những thành phần trong tế bào. Với hai loại flow cytometry không giống nhau là non-sorting (ko phân loại) và sorting (phân loại). FASC (Flourescent activated cell sorters) là những máy đếm tế bào theo dòng chảy sở hữu kinh nghiệm phân loại những thế bào được lưu lại huỳnh quang từ một hỗn hợp những quần thể tế bào.

Đang xem: Flow cytometry là gì

     
     Trước tiên, những hạt sẽ được đưa tới đèn laze trong một dòng chất lỏng. Ngẫu nhiên hạt hòa tan hoặc tế bào nào sở hữu kích thước từ 0.2-150 µm đều thích ứng; những tế bào từ những mô rắn phải được loại bỏ trước lúc phân tích. Lúc những hạt đi qua tia laze, chúng tán xạ ánh sáng sủa laze, ánh sáng sủa tán xạ và ánh sáng sủa huỳnh quang sẽ được thu tại thấu kính tại vị trí thích hợp. Sự phối hợp giữa cơ quan tách chùm tia và những kính lọc sẽ hướng ánh sáng sủa tán xạ và ánh sáng sủa huỳnh quang tới detector; sau cuối những detector sẽ tạo ra tín hiệu điện tỉ lệ thuận với tín hiệu quang học.
     Những thành phần chính của máy flow cytometer (đếm tế bào theo dòng chảy) và cell sorter (phân loại tế bào) bao hàm: hệ dung dịch, khối hệ thống quang học (ánh sáng sủa thúc đẩy và bộ thu ánh sáng sủa thúc đẩy), mạng lưới điện (detector) và một máy tính. Khối hệ thống dung dịch sở hữu trách nhiệm điều phối dòng dung dịch chứa những hạt tới nguồn sáng sủa. Khối hệ thống quang học thúc đẩy sẽ triệu tập nguồn sáng sủa tới những tế bào/ những hạt, còn khối hệ thống quang học thu nhận sẽ chuyển những ánh sáng sủa tán xạ hoặc ánh sáng sủa huỳnh quang tới mạng lưới điện tử. Mạng lưới điện sẽ phát hiện tín hiệu và chuyển những tín hiệu thành những thông tin số tỉ lệ thuận với cường độ ánh sáng sủa và máy tính sẽ phân tích những thông tin này.
Kỹ thuật flow cytometry được sử dụng rộng thoải mái trong nhiều ứng dụng nhằm mục đích phát hiện những kháng nguyên màng, tế bào chất và nhân. Ngoài ra, toàn bộ tế bào và những thành phần tế bào như bào quan, nhân, DNA, RNA, nhiễm sắc thể, cytokines, hormone và protein mà thậm chí được phát hiện trải qua kỹ thuật này. Việc phân tích những quy trình trong tế bào và quá trình tế bào nhờ việc đo lượng calcium và điện thế màng cũng là một trong những ứng dụng của flow cytometry. Nội dung bài viết dưới phía trên sẽ trình diễn kỹ hơn về những thành phần của một máy flow cytometry.
1. Khối hệ thống dung dịch
     Khối hệ thống dung dịch sở hữu vai trò vận chuyển những tế bào trong một dung dịch đi qua thiết bị để thu được những dữ liệu, khối hệ thống này bao hàm 2 thành phần: sheath fluid (dòng dung dịch bảo vệ/ dòng dung dịch bên phía ngoài) và pressurized line (dòng áp suất). Sheath fluid là một dung dịch pha loãng (thông thông thường là đệm PBS- phosphate-buffered saline), được tiêm vào buồng flow nằm tại trung tâm của thiết bị bởi dòng áp suất. Một áp suất ko khí cũng khá được tiêm vào những tế bào đã được hòa tan trong ống mẫu vào bên trong buồng flow. Dòng mẫu sẽ được đưa vào lõi trung tâm mà xung quang là loại dung dịch bảo vệ và trở thành dòng lõi (core fluid- một dòng rất hẹp chỉ để từng tế bào hoặc từng hạt đi qua), được tạo ra dựa trên sự khác lạ áp suất giữa dòng dung dịch bên phía ngoài (sheath fluid) và dòng mẫu (sample fluid), từ đó giúp triệu tập tế bào/hạt sở hữu trong mẫu thành dòng tế bào đơn để đi qua chùm tia laze. Do đó, quy trình này cho phép chiếu sáng sủa đồng đều mỗi tế bào nên người ta gọi là quy trình triệu tập thủy động lực học (hydrodynamic focusing).

Xem thêm: Quid Pro Quo Là Gì – Muốn Hiểu &#39Quid Pro Quo&#39

Hình 1: Nguyên tắc hoạt động và sinh hoạt cơ bạn dạng của kỹ thuật flow cytometry.
    Tỷ trọng đưa những tế bào vào chùm tia laze mà thậm chí được triển khai nhờ khối hệ thống máy flow cytometer dựa trên mục đích của phân tích. Ví dụ, tỉ lệ dòng chảy cao thường sử dụng cho việc thống kê giám sát như immunophenotyping ở tế bào động vật sở hữu vú, trong lúc đó, tỉ lệ dòng chảy thấp thường thích phù hợp với những ứng dụng yêu cầu độ sắc nét cao như phân tích thành phần DNA. Những thông số kỹ thuật quan trọng quan trọng thu được nhờ sự tiếp xúc những hạt với chùm tia laze tùy thuộc vào hoạt động và sinh hoạt tối ưu của những khối hệ thống dung dịch. Do đó, cần phải đảm nói rằng không tồn tại bong bóng khí và những mảnh vụn trong khối hệ thống này để những áp lực sẽ đồng đều ở mọi thời hạn.
2Khối hệ thống quang học
    Khối hệ thống quang học trong máy flow cytometry làm trọng trách chiếu ánh sáng sủa thúc đẩy bao hàm đèn laze, thấu kính và cơ quan thu ánh sáng sủa. Thấu kính sở hữu vai trò định hình và triệu tập chùm tia laze. Ánh sáng sủa laze được tạo ra bằng phương pháp thúc đẩy những điện tử (electron) đang ở trạng thái cơ bạn dạng lên trạng thái thúc đẩy sở hữu mức tích điện cao nhờ điện áp, sau một thời hạn ngắn (thông thường là 10-7 – 10-8 giây), những điện tử sẽ trở về trạng thái cơ bạn dạng và phát ra tích điện dưới dạng những photon ánh sáng sủa. Sau lúc laze chiếu vào tế bào, những ánh sáng sủa bị chệch hướng so với đường tryền thẳng do bắt gặp phải vật chống được gọi là ánh sáng sủa tán xạ. Với hai loại ánh sáng sủa tán xạ là forward scatter (FSC) và side scatter (SSC). Những yếu hèn tố tác động tới sự tán xạ ánh sáng sủa là màng tế bào, nhân, những hạt của tế bào, hình dạng và mặt phẳng tế bào. Nhìn chung kích thước của tế bào hoặc của một hạt và độ phức tạp bên trong tế bào được đặc hiệu bởi loại tán xạ. Ánh sáng sủa FSC là thành tựu của sự nhiễu xạ thu được dọc từ trục của chùm tia tới laze. FSC tỉ lệ với diện tích S mặt phẳng hoặc kích thước tế bào và thích ứng để phát hiện, phân biệt những hạt về kích thước, thường sử dụng phổ cập trong immuophenotyping. Còn ánh sáng sủa SSC bao hàm hầu hết những ánh sáng sủa khúc xạ và nhiễu xạ, được thu ở góc 90o so với chùm tia tới laze. SSC tỉ lệ với thành phần những hạt hoặc độ phức tạp bên trong tế bào. Dường như, ánh sáng sủa huỳnh quang sở hữu nguồn gốc từ kháng thể hoặc dye lưu lại huỳnh quang như là PI cũng khá được phản xạ tại cùng một góc với SSC.
Hình 2: Ánh sáng sủa tán xạ (light scattering). FSC tỉ lệ với kích thước, trong lúc đó SSC tỉ lệ với những thành phần và độ phức tạp bên trong tế bào.
    Với rất nhiều thông số kỹ thuật laze trong máy flow cytometer dựa trên loại chất huỳnh quang được thúc đẩy. Đèn argon laze (một đèn laze thường thì với bước sóng thúc đẩy 488 nm) được sử dụng để thúc đẩy nhiều dye tổng hợp như fluorescein isothiocyanate (FITC) và dye huỳnh quang tự nhiên như tảo và phytoplankton. Rất nhiều máy flow cytometer và sorter sở hữu thêm đèn laze sở hữu kinh nghiệm thúc đẩy chất huỳnh quang ở bước sóng thúc đẩy ở dải sóng UV (300-400nm) hoặc red diode thúc đẩy chất huỳnh quang ở dải sóng đỏ (630 nm).

Xem thêm: Stent Là Gì – 3 Biến Chứng Người Bệnh Cần Ph

    Khối hệ thống thu nhận ánh sáng sủa gồm thấu kính để thu ánh sáng sủa phát ra từ sự tương tác giữa chùm tia laze và hạt; một khối hệ thống gương và kính lọc để tách và sau đó hướng ánh sáng sủa sở hữu bước sóng đặc hiệu tới detector thích hợp. 

Về Viettingame.com

Viettingame.com - Chuyên trang web tổng hợp những thông tin hữu ích trên internet như thông tin về game, tin tổng hợp
Xem tất cả các bài viết của Viettingame.com →

Trả lời

Email của bạn sẽ không được hiển thị công khai.